Введение

Одной из приоритетных задач нашего государства и современного здравоохранения является формирование здоровья подрастающего поколения. По данным различных исследований последних лет показано, что микробиота пищеварительного тракта – это дискретный орган, оказывающий влияние на целый ряд физиологических процессов, а также иммунную резистентность и поведение человека. В связи с этим, состояние микробиома пищеварительного тракта может рассматриваться как один из интегральных критериев оценки состояния здоровья человека. В свою очередь, показателями индивидуального адаптогенеза являются качественные (биологические свойства) и количественные параметры микробиоты пищеварительного тракта [1,2,3,4,6,10,12,14].

Входными воротами пищеварительной и бронхо-легочной систем является полость рта и ее микробиом, состояние которого определяет колонизационную локальную резистентность, формирование микробиоты других биотопов и, как следствие, здоровье детей в целом. По данным литературы и результатам ранее проведенных исследований следует, что микробиота полости рта по качественным и количественным показателям коррелирует с микробиотой пищеварительной системы. В то же время, преимуществами использования ротовой жидкости является доступность забора биологической пробы, а также клиническая информативность биомаркеров данного биоматериала, отличающихся стабильностью, точностью обнаружения, а также обладающих высокой чувствительностью, специфичностью и воспроизводимостью результатов анализа, простоту выполнения и экономическую эффективность клинико-диагностических алгоритмов [1,2,3,5,7,8,11]. Кроме того, имеются научные публикации, указывающие на существование тесной динамической взаимосвязи микроэкологии пищеварительного тракта и резистентности организма, что позволяет в дальнейшем формировать группы риска с последующим проведением персонифицированной превентивной коррекции [6,8,9,11,13].

Следовательно, оценка состояния микробиома пищеварительного тракта, как одного из интегральных параметров здоровья, поиск биомаркеров, позволяющих объективно определить уровень резистентности ребенка является актуальным и перспективным направлением превентивной медицины в современной педиатрической практике.

Цель исследования

Цель настоящего исследования: определение и оценка биомаркеров, отражающих уровень резистентности организма ребенка и микроэкологического неблагополучия пищеварительного тракта, позволяющих сформировать группы риска для своевременного назначения персонифицированных корректирующих и профилактических мероприятий.

Материалы и методы

Тип исследования. Одномоментное (cross-sectional).

Способ отбора участников исследования. Исследование было одобрено Этическим комитетом ФБГОУ ВО Тверской ГМУ Минздрава России.

В рамках проведения научно-исследовательской работы было обследовано 173 новорожденных I и II группы здоровья в соответствии с Приказом Минздрава России от 10.08.2017 г. № 514н в возрасте от рождения до 7 дней жизни. Это все дети, соответствовавшие критериям включения, рождённые в ГБУЗ ТО "Областной клинический перинатальный центр им. Е.М. Бакуниной" в октябре месяце 2020 года.

Все дети были осмотрены неонатологом, для верификации состояния здоровья и уровня адаптационных резервов проведены ряд функциональных исследований (антропометрия, 12-канальная ЭКГ, ВНС-спектрометрия, ультразвуковое исследование органов брюшной полости).

Для определения бактериального компонента микробиоты ротовой жидкости проведено бактериологическое исследование с последующим определением микроэкологического варианта нормомикробиоты – первый, второй или третий. Они характеризуются определенным сочетанием индигенной и условно-патогенной микрофлоры, где наиболее оптимальным является первый, а наиболее неблагоприятным – третий вариант нормомикробиоты (патент на изобретение № 2602697 от 03.03.2015).

Для определения представителей семейства герпесвирусов микробиоты полости рта, вирусного компонента, было проведено молекулярно-генетическое исследование ротовой жидкости на наличие ДНК вируса простого герпеса 1 и 2 типа, вируса Эпштейна-Барр, вируса герпеса 6 типа, цитомегаловируса. В исследовании использованы тест-системы для выделения и амплификации нуклеиновых кислот "РибоПреп" и "АмплиСенс® EBV/CMV/HHV6-скрин-FL" ФБУН Центральный НИИ эпидемиологии Роспотребнадзора с проведением полимеразной цепной реакции в режиме "реального времени" в амплификаторе Applied Biosystems.

Локальная иммунная резистентность определена по уровню лизоцима (турбидиметрия), секреторного иммуноглобулина A и авидности антител в ротовой жидкости с использованием иммуноферментного анализа ("Вектор-Бест").

Данная научно-исследовательская работа проведена в рамках реализации государственного задания (№ 056-00150-18-00 от 27.12.2017) с соблюдением основных норм биоэтики научных исследований (заключение Этического комитета ФГБОУ ВО Тверской ГМУ Минздрава России от 21 января 2018). Исследования выполнены в федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего образования "Тверской государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации, по адресу 170036, г. Тверь, Петербургское шоссе, д. 115, корп. 1. (Лицензия на медицинскую деятельность № ФС-69-01-000812 от 15.02.2018 г., сроком действия – бессрочно).

Способы представления и обработки данных. Статистическая обработка полученных в работе данных проводилась с использованием пакетов программ IBM SPSS Statistics 23.0 и Win PEPI 11.64. Количественные данные представлены в виде M±m, качественные – абсолютных значений и долей (%). Для оценки статистической значимости различий между средними использовался дисперсионный анализ (ANOVA) с апостериорным тестом Тьюки, для качественных переменных – точный тест Фишера с поправкой Сидака на множественность сравнений. Подготовка текста работы была выполнена с использованием программы Microsoft Word 2016.

Результаты

Первый этап исследования включал определение бактериально-вирусных ассоциаций микробиоты полости рта у всех новорожденных I и II группы здоровья.

При определении микроэкологического варианта нормомикробиоты по бактериальному компоненту оптимально благоприятный первый вариант был выявлен у 43 детей, второй – у 77 детей, и прогностически неблагоприятный третий вариант – у 53 обследованных, что составило 24,9%, 44,5% и 30,6% соответственно (таблица 1).

При сопоставлении результатов молекулярно-генетического исследования вирусной составляющей у здоровых новорожденных с различными вариантами бактериальной микрофлоры, выявлено, что для первого варианта нормомикробиоты вируспозитивные образцы составили 30,3%, для второго – 40,3% и для третьего – 73,6% соответственно. Следовательно, вирусный компонент микробиоты достоверно чаще определялся у детей с третьим вариантом нормомикробиоценоза, прогностически более неблагоприятным (р≤0,05), что было характерно также и для ассоциации представителей герпесвирусов. Так, частота выявления ДНК вируса Эпштейна-Барр, а также вируса герпеса 6 типа была достоверно выше у лиц с третьим микроэкологическим вариантом по сравнению с наиболее оптимальным первым вариантом нормомикробиоты (р≤0,05).

Полученные данные свидетельствуют, что при нарушении соотношения облигатной и факультативной микрофлоры в бактериальном звене происходят достоверные изменения как качественных, так и количественных параметров вирусной составляющей (табл. 1).

Анализируя спектр вирусной составляющей, было выявлено, что наиболее часто определялась ДНК вируса герпеса 6 типа, что составило 84,6%, 64,5% и 79,5% соответственно, для первого, второго и третьего микроэкологического варианта (табл. 2). Кроме того, в более 50% вируспозитивных образцов определялась ДНК вируса Эпштейна-Барр. Ассоциации данных вирусов, среди всех вирусопозитивных реципиентов наиболее часто выявлены у новорожденных с третьим вариантом нормомикробиоты. Следует отметить, что наличие у обследованных новорожденных ДНК вируса простого герпеса так же, как и в ранее проведенных исследованиях [3,6], носило спорадический характер, что в целом соответствует общей тенденции у здоровых людей различных возрастных групп.

Таблица 1. Количественные параметры бактериально-вирусных ассоциаций микробиоты полости рта у новорожденных детей I-II группы здоровья

Таблица 2. Качественные параметры бактериально-вирусных ассоциаций микробиоты полости рта у вируспозитивных новорожденных I-II группы здоровья

Для поиска взаимосвязи между бактериально-вирусными ассоциациями микробиома полости рта и параметрами локальной иммунной резистентности было исследовано содержание лизоцима, секреторного IgA и его авидность в ротовой жидкости при различных микроэкологических вариантах нормомикробиоценоза (табл. 3).

Отмечено, что уровень секреторного IgA был существенно выше у детей с третьим, наиболее неблагоприятном вариантом нормомикробиоты. Однако функциональная активность антител, которая характеризуется показателем авидности, имела обратную зависимость и была достоверно выше у реципиентов с первым вариантом нормомикробиоценоза.

Кроме того, при снижении качества микроэкологических параметров от первого к третьему варианту микробиоценоза, у обследованных также наблюдалась тенденция к снижению уровня лизоцима ротовой жидкости.

Следовательно, выявленные изменения неспецифической иммунной реактивности в зависимости от микроэкологического варианта нормомикробиоты подтверждают наличие тесной динамической взаимосвязи микроэкологии и локальной резистентности полости рта у новорожденных детей.

Таблица 3. Показатели локальной иммунной резистентности у новорожденныхI-II группы здоровья с различными вариантамимикробиоты пищеварительного тракта

В ходе настоящего исследования созданы базы данных, содержащие клинико-анамнестические, молекулярно-генетические, биохимические и бактериологические показатели новорожденных (БД № 2017620239 от 22.02.2017, БД №2018622056 от 17.12.2018). При статистической обработке полученных данных выявлено, что наиболее значимым для оценки резистентности организма новорожденных детей является вирусный компонент, ассоциированный с представителями герпесвирусов.

Заключение

В ходе проведенного исследования была выявлена взаимосвязь между бактериально-вирусными ассоциациями микробиоты полости рта, представленными условно-патогенной бактериальной микрофлорой и представителями герпесвирусов, а также параметрами локальной иммунной резистентности у новорожденных детей. Состояние бактериальной и вирусной составляющей, бактериально-вирусные ассоциации полости рта характеризуют состояние резистентности организма в целом и могут использоваться в качестве интегрального показателя для оценки состояния здоровья новорожденных детей на этапе донозологической диагностики. Микроэкологический мониторинг на основании выявленных биомаркеров позволит сформировать группы риска по снижению резистентности у новорожденных детей для своевременного назначения персонифицированных корректирующих и профилактических мероприятий.